bradford法测蛋白浓度步骤（2023年10月12日bradford法测蛋白浓度）

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1、一、原理不同BCA蛋白定量：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，吸光强度与蛋白浓度成正比。

2、测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

3、Bradford法蛋白定量：在一定的浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

4、二、样品中物质含量不同BCA蛋白定量：样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。

5、Bradford法蛋白定量：样品中SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。

6、扩展资料BCA蛋白定量的注意事项：BCA蛋白定量时，吸光度可随时间的延长不断加深，且显色反应会随温度升高而加快，故如果浓度较低，适合较高温度孵育or延长孵育时间。

7、2、标准蛋白液的加量应当准确，如果加量不准确，会导致制作出来的标准曲线出现偏差，影响待测样品的浓度计算，所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液，另一方面应使用精确度高的移液枪。

8、3、为加快BCA蛋白定量测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但切勿过热。

9、 4、当结果出现空白组本身就有较高的背景，可用Bradford法蛋白定量重新测定蛋白浓度。

10、参考资料来源:百度百科-蛋白定量。

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