聚丙烯酰胺凝胶（聚丙烯酰胺水凝胶）

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丙烯酰胺凝胶长时间会氧化吗

不会。丙烯酰胺凝胶，化学物质名称，在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好，聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；对pH和温度变化较稳定；几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；样品不易 *** ，且用量少，其灵敏度可达10-6g；凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。

聚丙烯酰胺凝胶的化学式是？

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合zd成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，

由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥内粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。

聚丙烯酰胺简称PAM，分子式：[C3H5ON]n

，结构式为[－CH2－CH(CONH2)]n－，分子量容100～

500万。

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么?

聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis,PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质.在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分...

聚丙烯酰胺凝胶电泳加速剂是什么

聚丙烯酰胺凝胶电泳加速剂是聚丙烯酰胺凝胶的一种加速反应剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳加速剂是聚丙烯酰胺凝胶的一种加速反应剂，聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N、N-甲叉双丙烯酰胺，在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。

丙烯酰胺凝胶一定要加四甲基乙二胺吗

不是的。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种使用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种载体介质上，可以根据被分离物质的分子大小和分子电荷进行分离。

聚丙烯酰胺凝胶具有以下优点：

①聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺与N,N'亚甲基双丙烯酰胺聚合而成的高分子。凝胶晶格是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少有离子侧基，因此电渗效应较小，不易与样品发生相互作用。

②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种合成物质，聚合前可以调节单体的浓度比，形成不同程度的交联结构，其孔隙率可以在很大范围内变化，根据根据被分离物质分子的大小，可以选择合适的凝胶成分，使其既具有合适的孔隙率，又具有较好的力学性能。

一般来说，含7-@7.5%丙烯酰胺的凝胶具有适合分离分子量从到100万的物质的机械性能，对于以下的蛋白质，使用15-30%丙烯酰胺凝胶，含4%丙烯酰胺的凝胶可用于特别大的分子量。大孔胶易碎，小孔胶很难从管子中取出。因此，当丙烯酰胺的浓度增加时，可以减少双含凝胶。丙烯酰胺改善凝胶的力学性能。

③在一定浓度范围内具有热稳定性聚丙烯酰胺。凝胶无色透明，易于观察，可直接用检测器测量。

④丙烯酰胺是一种比较纯的化合物，可以通过精制来减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲基双丙烯酰胺。丙烯酰胺称为单体，甲基双丙烯酰胺称为交联剂。在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝胶。

在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要催化剂，催化剂包括引发剂和促进剂两部分。引发剂在凝胶形成过程中提供初始自由基，通过自由基的传递，丙烯酰胺变成自由基开始聚合反应，促进剂可以加快引发剂的自由基释放速度。常用引发剂和促进剂的相容性如下：

聚合催化剂相容性

发起者

加速器

(NH4)

(NH4)

核黄素

注：(NH4)，过硫酸铵：N,N,N,N'；四甲基乙二胺：β-二甲氨基丙氨酸过硫酸铵引发的反应称为化学聚合；核黄素引发的反应溶液需要被强光照射，称为光聚合。聚丙烯酰胺聚合受以下因素影响：

1、大气中的氧气可以淬灭自由基，终止聚合反应，因此在聚合过程中应将反应液与空气隔离。

2、某些材料，例如有机玻璃，会抑制聚合。

3、某些化学物质，例如红血盐，可以减缓反应。

4、高温聚合快，低温聚合慢。制备凝胶时必须考虑以上几点。凝胶的网目尺寸、机械强度和透明度很大程度上取决于凝胶的浓度和交联度。每100毫升凝胶溶液中所含单体和交联剂的总克数称为凝胶浓度，常用T%表示；连通性，通常以C%表示，可以通过以下公式计算：

公式

a：丙烯酰胺的克数； b：亚甲基二丙烯酰胺的克数； m：缓冲液体积（ml） 凝胶浓度过高时聚丙烯酰胺凝胶电泳仪，凝胶硬而脆，易破裂；凝胶浓度过低，凝胶较软，不易操作。

交联度太高，凝胶不透明，不灵活；交联度太低，凝胶糊状。 聚丙烯酰胺凝胶具有较高的粘度，它不会阻止对流降低 *** 能力，而且由于它具有三维网络结构，分子通过该网络的能力将取决于凝胶孔隙率和分离物质颗粒的大小和形状，这就是凝胶的分子筛分作用。

由于这种分子筛效应，这里的凝胶不仅仅是一种纯载体。因此，电泳时除了要注意电泳的基本原理外，还要注意与凝胶本身有关的各种性质（网孔大小和形状等）。可通过下式选择合适的凝胶目数。

公式

式中：P为网孔的平均直径聚氯化铝，C为聚合物浓度，d为聚合物的分子直径（如果不是卷曲分子，则应为5A），K为常数， K的值取决于橡胶的溶胀量。几何构型，如果聚合物的链以近似直角交联，大约为1.5 根据这个公式，我们可以通过聚合物浓度C来近似计算网格直径，例如，一直知道聚合物浓度为5%，网眼的平均直径应该是：

公式

这样的计算是粗略的，与实际情况有一定的距离。有人测得丙烯酰胺溶液的总浓度（T）为20%。在六种不同比例的双丙烯酰胺存在下聚丙烯酰胺凝胶电泳仪，聚合后的网目尺寸。

发现孔径与总浓度有关。总浓度越大，孔径越小，机械强度越强。当总浓度不变时，Bis浓度为5%时亚甲基双丙烯酰胺（Bis）的孔径最小，高于低于此值时，聚合物孔径变大，凝胶孔径是凝胶电泳中的一个重要参数，往往决定着电泳的分离效果。

经过不断的实践，得到了如表3所示的经验值。一般来说，体内大多数蛋白质使用浓度为@7.5%的凝胶，电泳结果往往令人满意。 ，所以这种浓度组成的凝胶称为“标准凝胶”。

对于那些用于关键研究的凝胶，更好度通过一系列 10% 的凝胶浓度阶梯进行预测试来选择更佳凝胶浓度。

表3 不同分子量范围的蛋白质和核酸在凝胶电泳中的凝胶浓度百分比

物质

分子量范围

适用凝胶浓度(%)

蛋白质

5×105

20-30 15-20 10-15 5-10 2-5

核酸

10-20 5-10 2-3.6

聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续和不连续两类。前者是指整个电泳系统中使用的缓冲液，pH值和凝胶目数相同，后者是指电泳系统中使用的两种或两种以上的缓冲液，pH值和孔径。间断电泳可以在电泳过程中将稀释的样品浓缩成层，从而提高分辨能力。

当蛋白质在 聚丙烯酰胺 凝胶中进行电泳时，其迁移率取决于其净电荷以及分子大小和形状等因素。如果加入试剂消除电荷因子，电泳迁移率取决于分子的大小，通过电泳可以确定蛋白质的分子量。 1967年等人发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有此作用。

当向蛋白质溶液中加入足量的 SDS 和巯基乙醇时，SDS 可以减少蛋白质分子中的二硫键。由于十二烷基硫酸盐的负电荷，各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其量大大超过原始蛋白质分子的电荷量，从而掩盖了不同蛋白质之间的原始差异。电荷的差异也会引起SDS与蛋白质结合后的构象变化。

蛋白质-SDS 复合物形成一个近似“雪茄”形的长椭圆棒。不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度不同，约为18A。这种蛋白质-SDS复合物在凝胶中。蛋白质的迁移率不再受原始蛋白质的电荷和形状的影响，而是取决于分子量的大小，因此可以使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳来确定蛋白质的分子量

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么？

聚丙烯酰胺凝胶电泳（英语：

polyacrylamide

gelelectrophoresis，简称page）

作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称acr)和交联剂n，n’一亚甲基双丙烯酰胺(简称bis)在催化剂过硫酸铵(ap)，n，n，n’，n’

四甲基乙二胺(temed)作用下，聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-page）及sds-聚丙烯酰胺凝胶（sds-page）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。

sds-page仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（sds即十二烷基硫酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。

sds是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质

sds复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是棒长的函数。这种电泳方法称为sds聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称sds—page)。由于sds

page可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具 *** 结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么

sds—page后，就只出现一条蛋白质区带。sds—page可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、ph和凝胶孔径等所组成。

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